تعیین خصوصیات فنوتیپی و ژنوتیپی عامل بیماری لکه زاویه ای خیار در استان های فارس و کرمان

طی سال های 1390 و 1391، 25 جدایه (psl) pseudomonas syringae pv. lachrymansاز گلخانه های کشت خیار در استان های فارس و کرمان جداسازی گردید. کلیه جدایه ها از لحاظ خصوصیات فیزیولوژیکی، بیوشیمیایی، تغذیه ای و تکثیر قطعه ی 560 bp توسط آغازگرd21 و d22 مورد بررسی قرار گرفتند. همچنین به منظور تنوع جدایه ها آزمونrep-pcr با استفاده از آغازگرهای box و eric صورت گرفت. جدایه های مورد بررسی بر روی محیط کشت های غذایی na، پرگنه هایی گرد، به رنگ کرم روشن مایل به سفید و در برخی موارد مایل به زرد با حاشیه ای صاف را تولید می کردند. جدایه های مورد بررسی، گرم منفی و بر اساس واکنش به آزمون های گروه lopat: لوان مثبت، اکسیداز منفی، لهانیدن سیب زمینی منفی، هیدرولیز آرژنین منفی و قادر به ایجاد فوق حساسیت روی توتون بودند. همه ی جدایه ها کاتالاز مثبت و بر اساس واکنش به آزمون های گروه gatta در هیدرولیز ژلاتین و آسکولین دارای واکنش مثبت بوده و در مقابل در آزمون های تیروزیناز و استفاده از تارتارات منفی بودند. آنالیز عددی خصوصیات فنوتیپی، با استفاده از نرم افزار ntsys-pc نشان داد که جدایه های psl جدا شده از استان های فارس و کرمان از لحاظ ویژگی های فنوتیپی و بیوشیمیایی به هم شبیه بوده و با جدایه pss 8/83% و با p. fluorescens، 50% شباهت داشتند. در آزمون بیماریزایی، پس از 7 تا 14 روز علائم سبززردی، آبسوختگی و لکه زاویه ای دیده شد. جدایه های مورد نظر پس از مایه زنی به دیگر اعضای خانواده ی کدوئیان نظیر کدو، خربزه، هندوانه و طالبی علائم را نشان دادند. با این وجود علائم در خیار بسیار واضح تر نسبت به بقیه بود. این باکتری بر روی گیاهان دیگری نظیر گوجه فرنگی، بادمجان و فلفل نیز مایه زنی شد، اما هیچ گونه علائمی دیده نشد. همچنین به منظور تفکیک پاتوار pslاز پاتوار pssاز جفت آغازگرهای b1 و b2 استفاده شد که این آغازگر تنها قادر بود قطعه dna با اندازه ی تقریبی 752 جفت باز را در جدایه های pss تکثیر کند در حالیکه در psl قادر به تکثیر این قطعه نبود. آزمون rep-pcr با استفاده از آغازگر box، جدایه ها به سه گروه تفکیک شدند و با استفاده از آغازگرeric ، به دو گروه تفکیک شدند. تعیین توالی ژن 16s rrnaجدایه psl نشان داد که بین جدایه psl و pseudomonas syringae های موجود در بانک ژن 97% شباهت وجود دارد، که نشان دهنده ی قرار گرفتن همه جدایه ها در یک گونه p.syringae می باشد.